PG-LH7人肺巨细胞癌低转移细胞株

PG-LH7人肺巨细胞癌低转移细胞株是源自人类肺巨细胞癌的贴壁生长细胞系，经体外筛选获得低转移表型，既保留肺巨细胞癌的核心恶性特征（如巨细胞形态、无限增殖），又具备转移能力弱的独特属性，成为研究肺癌转移机制、筛选转移相关基因及开发抗转移药物的理想体外模型，为肺癌转移防治的基础研究与临床转化提供关键实验载体。

一、核心生物学特性

（一）来源与低转移表型起源

该细胞株从肺巨细胞癌患者手术切除的肿瘤组织中分离，经多次体外 Transwell 迁移 / 侵袭实验与裸鼠体内成瘤 - 转移实验筛选，获得转移能力显著低于亲本细胞的亚克隆株（PG-LH7）。其低转移性主要体现在：体外 Transwell 实验中，穿膜细胞数仅为高转移肺巨细胞癌细胞株（如 PG-BE1）的 15%-20%；裸鼠尾静脉注射后，肺内转移灶数量不足亲本细胞的 10%，且无远处器官（如肝、骨）转移，为研究肺癌转移抑制机制提供天然对照模型。

（二）形态与增殖特征

细胞呈典型肺巨细胞癌形态：部分细胞体积巨大（直径可达 50-80μm），胞质丰富且含大量嗜酸性颗粒，可见多核或巨核现象（核数量 2-5 个，核仁明显）；贴壁生长时排列松散，无规则结构，细胞间隙较大，与正常肺上皮细胞 “铺路石" 样排列差异显著。增殖能力较强，倍增时间约 30-36 小时，对数生长期增殖速度与高转移肺巨细胞癌细胞株无显著差异，传代 50 代以上仍能稳定维持低转移表型与巨细胞形态，无明显增殖退化。

（三）分子与功能特征

分子层面，PG-LH7 细胞存在肺癌常见的基因异常（如 p53 基因突变、EGFR 表达上调），同时具备低转移相关的分子特征：转移抑制基因（如 nm23-H1、KAI1）表达显著高于高转移细胞株；基质金属蛋白酶（MMP-2、MMP-9）活性降低（酶谱法检测显示活性仅为 PG-BE1 的 25%-30%）；上皮 - 间质转化（EMT）标志物异常，E - 钙黏蛋白（上皮标志物）表达上调，N - 钙黏蛋白、波形蛋白（间质标志物）表达下调，提示其上皮表型保留较好，间质化程度低，这是其转移能力弱的关键分子机制。

二、体外培养关键条件

（一）培养基与环境控制

基础培养基选用 RPMI-1640 培养基，添加 10%-12% 胎牛血清（需筛选低内毒素批次，避免影响细胞转移相关蛋白表达）、1% glutamine（维持细胞代谢稳定）及 1% 无菌防护试剂（预防细菌污染）。无需额外添加转移相关诱导因子，避免诱导细胞表型改变。培养环境需严格维持 37℃、5% CO?、95% 湿度，CO?浓度波动不超过 ±0.5%，pH 控制在 7.2-7.4，渗透压 280-320mOsm/kg，环境温度或 pH 异?；岬贾孪赴扌翁АMP 活性异常，需实时监控。

（二）传代与维护操作

细胞贴壁生长且增殖较快，传代周期约 2-3 天，当细胞汇合度达 75%-85% 时需及时传代（避免过度汇合导致细胞聚团、活性下降）：用含 EDTA 的消化液 37℃孵育 2-3 分钟（因细胞体积大、贴壁较牢，消化时间略长于普通癌细胞），待细胞边缘收缩、脱离培养瓶壁时，加入含血清培养基终止消化，轻轻吹打（避免剧烈吹打导致巨细胞破裂）制成单细胞悬液，按 1:4-1:6 比例接种至新培养瓶。每日需通过倒置显微镜观察细胞形态，若发现巨细胞比例下降（<30%）或 MMP 活性异常，需及时复苏早期冻存细胞，确保低转移表型稳定。

（三）冻存与复苏

冻存时使用含 10% 二甲基亚砜（DMSO）、20% 胎牛血清的 RPMI-1640 培养基作为冻存液，将细胞浓度调整为 3×10?-5×10? cells/mL（因细胞体积大，浓度略低于普通细胞），分装后采用梯度降温法（4℃ 30 分钟→-20℃ 1 小时→-80℃过夜→液氮保存），减少冰晶对巨细胞的损伤；复苏时，37℃水浴 1-2 分钟快速解冻，立即加入 5 倍体积预热培养基稀释，800×g 离心 5 分钟去除 DMSO（避免 DMSO 对巨细胞毒性），重悬后接种培养，复苏存活率可达 70% 以上，复苏后需通过 Transwell 实验验证转移能力，确保低转移表型未改变。

三、主要实验应用场景

（一）肺癌转移机制研究

PG-LH7 细胞是该领域的核心对照模型：通过与高转移细胞株（如 PG-BE1）对比，采用转录组测序、蛋白质组学分析筛选差异表达的转移相关基因（如 nm23-H1、MMP-9），明确这些基因对肺癌转移的调控作用；通过基因编辑技术（如 CRISPR-Cas9）敲除 nm23-H1 基因，观察细胞转移能力（Transwell 穿膜数、裸鼠转移灶数量）的变化，验证转移抑制基因的功能；此外，可研究 EMT 调控通路（如 TGF-β/Smad 通路）对细胞转移表型的影响，解析 EMT 与肺癌转移的关联机制。

（二）抗转移药物筛选与评估

该细胞株适用于肺癌抗转移药物的研发：将候选抗转移药物（如 MMP 抑制剂、EMT 抑制剂）作用于细胞，通过 Transwell 迁移 / 侵袭实验检测药物对细胞转移能力的抑制效果；采用酶谱法检测药物对 MMP-2、MMP-9 活性的影响，或通过 Western blot 检测药物对 E - 钙黏蛋白、N - 钙黏蛋白表达的调控，明确药物作用靶点；在裸鼠荷瘤模型中，通过尾静脉注射 PG-LH7 细胞，给予药物干预后观察肺转移灶数量，评估药物体内抗转移效果，为临床抗转移药物研发提供体外 - 体内实验数据支持。

（三）转移相关诊断标志物筛选

利用细胞低转移的分子特征，可筛选肺癌转移风险诊断标志物：通过对比 PG-LH7 与高转移细胞株的 microRNA（miRNA）表达谱，筛选差异表达的 miRNA（如 miR-34a、miR-200c），验证这些 miRNA 在临床肺癌患者血清中的表达水平，分析其与患者转移风险的相关性；检测细胞分泌的外泌体中转移相关蛋白（如 nm23-H1、MMP-9）的含量，探索外泌体标志物在肺癌转移诊断中的应用价值，为开发肺癌转移早期诊断试剂提供候选标志物。

四、实验应用注意事项

实验前需通过多重方法验证细胞低转移表型：Transwell 实验检测转移能力、Western blot 检测转移相关蛋白（nm23-H1、MMP-9）表达、裸鼠体内转移实验验证（必要时），避免传代超过 50 代导致表型漂移；不同批次胎牛血清对细胞 MMP 活性影响较大，需通过酶谱法筛选适配血清，固定批次使用，确保实验重复性。

培养过程中需避免细胞过度消化或剧烈吹打，否则会导致巨细胞破裂、核丢失，影响细胞形态与功能；操作需严格无菌，细胞对支原体污染敏感，污染后会导致 MMP 活性异常、转移能力改变，每传代 3 次需通过 PCR 检测支原体，污染后需立即丢弃以防交叉感染。

结果解读需结合肺癌临床特征，PG-LH7 细胞虽为低转移模型，但体外培养无法wan全模拟体内肿瘤微环境（如免疫细胞浸润、血管生成），实验结论需结合临床肺癌患者样本数据（如转移灶组织与原发灶组织的基因表达对比）综合分析；同时，需与其他类型低转移肺癌细胞株（如 A549 低转移亚克?。┒员龋魅贩尉尴赴┑妥频亩捞鼗?，避免结果片面性。