PsL-EGFmAb-2人源杂交瘤细胞

PsL-EGFmAb-2人源杂交瘤细胞是通过人 B 淋巴细胞与永生化骨髓瘤细胞融合获得的功能性细胞，核心功能为稳定分泌抗表皮生长因子（EGF）的人源单克隆抗体。其兼具免疫细胞的抗体合成能力与肿瘤细胞的无限增殖特性，在 EGF 相关研究、靶向药物开发及诊断试剂制备中具有不可替代的价值，是生物医学领域重要的工具细胞。

一、细胞核心特性

（一）来源与融合优势

该细胞由经 EGF 免疫的人外周血 B 淋巴细胞，与缺陷型人骨髓瘤细胞（如 SP2/0-Ag14 人源化株）通过聚乙二醇诱导融合构建。融合后细胞突破普通 B 淋巴细胞 “短期存活、有限增殖" 的局限，可在体外长期培养（传代 50 代以上），同时保留 B 淋巴细胞针对 EGF 的特异性抗体分泌能力，实现 “无限增殖 + 定向产抗" 的双重优势。

（二）形态与增殖特征

细胞形态呈圆形或椭圆形，以悬浮生长为主，少数细胞因培养条件差异呈轻微贴壁；胞质饱满，含大量粗面内质网与高尔基体（为抗体合成提供结构基?。?，细胞核大且核仁明显。增殖速度中等，倍增时间 24-36 小时，对数生长期细胞密度可达 5×10^5 cells/mL，活力稳定在 90% 以上，适宜大规模培养扩增。

（三）抗体分泌特性

这是细胞最核心的功能特征：分泌的抗 EGF 抗体为纯人源型，无鼠源抗体的免疫原性，可直接用于体内实验；特异性ji强，仅与 EGF 蛋白的抗原表位结合，不与 EGF 受体（EGFR）、转化生长因子 -α（TGF-α）等同源分子交叉反应；亲和力高，解离常数（Kd）达 10^-9-10^-10 mol/L，能高效捕获或中和 EGF；分泌量稳定，常规摇瓶培养时，每毫升培养液可产抗 5-15μg，通过生物反应器优化培养可提升至 30μg/mL 以上。

二、体外培养与抗体获取

（一）培养条件控制

基础培养基选用无血清杂交瘤专用培养基或含 20% 胎牛血清的 RPMI-1640 培养基：无血清培养基可减少杂蛋白干扰，适合抗体纯化；含血清培养基需筛选低内毒素批次，避免影响抗体质量。培养环境需严格维持 37℃、5% CO?、95% 湿度，悬浮培养时摇瓶转速设为 80-120 rpm，确保细胞均匀分布，避免聚团缺氧。

（二）细胞维护与传代

当细胞密度达 2×10^5-5×10^5 cells/mL、活力≥85% 时需传代，按 1:3-1:5 比例接种至新鲜培养基，每 2-3 天传代一次。每日需用台盼蓝染色检测活力，若活力低于 80% 或出现直径 > 100μm 的细胞团，需调整摇速或更换培养基。冻存时采用含 10% 二甲基亚砜（DMSO）的无血清冻存液，梯度降温后存入液氮，复苏存活率可达 80% 以上。

（三）抗体纯化流程

收集培养上清后，经 0.22μm 滤膜去除细胞碎片，采用 Protein A 亲和层析法纯化：上样后用 pH 7.0 缓冲液冲洗杂蛋白，再用 pH 3.0-3.5 缓冲液洗脱抗体，洗脱后立即中和至 pH 7.0，最后通过超滤浓缩，获得纯度≥95% 的抗 EGF 抗体，满足实验与应用需求。

三、主要应用场景

（一）EGF 相关机制研究

细胞分泌的抗体可作为特异性探针，通过免疫沉淀（IP）捕获细胞内 EGF 蛋白，结合 Western blot 分析其表达水平；或通过免疫荧光技术定位 EGF 在组织中的分布，研究其在肺癌、乳腺癌等疾病中的表达变化。此外，利用抗体中和 EGF，可阻断其与 EGFR 的结合，观察 PI3K/AKT、RAS/MAPK 等信号通路的活性变化，明确 EGF 对细胞增殖、凋亡的调控机制。

（二）靶向药物开发

该细胞分泌的人源抗体可直接作为候选药物，在体外通过 MTT 实验检测其对 EGF 高表达肿瘤细胞（如 A549 肺癌细胞）的抑制作用；在体内构建裸鼠荷瘤模型，评估抗体的抑瘤效果。同时，可基于该抗体进行改造，如偶联hua疗药物构建抗体偶联药物（ADC），或修饰抗体片段提升组织穿透性，开发更高效的靶向治疗药物。

（三）诊断试剂制备

将抗体标记辣根过氧化物酶（HRP）或荧光素，可开发 EGF 检测 ELISA 试剂盒，实现血清、组织液中 EGF 浓度的快速定量，为 EGF 相关肿瘤的早期诊断提供依据；也可将抗体固定于免疫层析试纸条，构建快速检测试纸，满足临床即时检测需求。

四、实验注意事项

细胞培养中需定期（每传代 5-10 次）通过 ELISA 检测抗体浓度与亲和力，防止细胞基因突变导致产抗能力下降；无血清培养时需逐步降低血清浓度，避免细胞因环境骤变死亡?？固宕炕笮杓觳饽诙舅睾浚?lt;0.1 EU/mg）与纯度，确保符合实验标准。此外，使用抗体检测复杂样本时，需设置对照排除非特异性结合干扰，保证结果准确性。