MOLT-4人急性淋巴母细胞白血病细胞

MOLT-4人急性淋巴母细胞白血病细胞是 1964 年从一名 19 岁男性急性淋巴母细胞白血?。ˋLL，T 细胞型）患者外周血中分离建立的永生化细胞系。其保留 T 系急性淋巴母细胞的核心特征，兼具明确的病理背景与稳定的实验属性，成为白血病基础研究、药物研发及临床转化的 “标准化工具细胞"，为解析 T-ALL 发病机制、优化治疗方案提供关键支撑。

一、核心生物学特性

在倒置显微镜下，MOLT-4 细胞呈圆形或类圆形，细胞质少且呈嗜碱性（因胞内核糖体密集，支持高代谢需求），细胞核大而圆，占细胞体积 2/3 以上，核仁清晰（1-2 个），染色质呈细颗粒状，与临床 T-ALL 患者骨髓中白血病细胞形态高度一致。

细胞稳定表达 T 淋巴细胞特异性标志物：CD2（T 细胞活化共受体）、CD3（T 细胞受体复合物核心）、CD4（辅助性 T 细胞标志）、CD7（早期 T 细胞标志），同时表达白血病相关抗原 CD99；不表达 B 细胞标志物 CD19 及髓系标志物 CD13，明确其 T 系淋巴母细胞属性，与 T-ALL 免疫分型wan全匹配。

MOLT-4 为wan全悬浮生长细胞，无需贴附基质，细胞均匀分散于培养基，少量形成松散小聚团（直径≤3 个细胞，不影响活性）。标准培养下，种群倍增时间约 24-30 小时，增殖活性稳定，传代后可快速恢复生长。

最关键特性是药物敏感性：对临床常用抗白血病药物（如长春新碱）高度敏感，药物处理后会出现典型凋亡特征（细胞皱缩、染色质凝聚、凋亡小体形成），且凋亡率与药物浓度呈剂量依赖，为药物活性评价提供理想模型。此外，经 PHA（植物血凝素）刺激可轻微活化，表达少量 IL-2 受体，模拟白血病细胞异?；罨刺?。

细胞携带 T-ALL 相关遗传学改变：多为超二倍体核型，原癌基因 MYC 表达上调（驱动细胞恶性增殖），抑癌基因 p53 功能正常 —— 这使其对 DNA 损伤类药物敏感，p53 通路激活可诱导细胞凋亡，与部分临床 T-ALL 患者遗传学特征吻合，为分子机制研究提供明确背景。

二、主要研究应用场景

MOLT-4 是解析 T-ALL 发病分子机制的核心工具。通过高通量测序对比其与正常 T 细胞的基因差异，可筛选出 NOTCH1、TLX1 等关键致病基因。例如，敲除 NOTCH1 后，细胞增殖速率下降 40%、凋亡率升高 30%，明确该通路对 T-ALL 细胞增殖的驱动作用。

同时，细胞存在糖酵解增强的 Warburg 效应，抑制己糖激酶等糖酵解酶可显著抑制增殖，揭示代谢异常在 T-ALL 中的作用，为代谢靶向治疗提供理论基础。

依托明确的药物敏感性，MOLT-4 广泛用于药物筛选：通过 CCK-8 法、MTT 法检测候选药物（如新型生物碱、靶向小分子）对细胞增殖的抑制效果，计算 IC50 值评估活性 —— 若化合物 IC50 低于 10μmol/L 且凋亡率超 50%，则提示具潜在抗白血病活性。

在耐药机制研究中，长期低剂量药物诱导可建立耐药株（如长春新碱耐药株 MOLT-4/VCR），对比发现多药耐药基因 MDR1（编码 P - 糖蛋白）表达上调，使用 MDR1 抑制剂维拉帕米可部分恢复敏感性，为逆转耐药提供靶点。

在 CAR-T 细胞治疗研发中，MOLT-4 因表达 CD3、CD4，可作为靶向 CAR-T 细胞的体外杀伤靶细胞。例如，CD3 靶向 CAR-T 细胞对其杀伤率达 70% 以上，且能抑制增殖，为 CAR-T 临床前研究提供数据支持。此外，细胞也用于免疫检查点抑制剂（如 PD-1/PD-L1 抑制剂）活性评价，检测药物对白血病细胞免疫逃逸的阻断效果。

三、细胞培养关键要点

常规使用 RPMI-1640 培养基，添加 10%-15% 低内毒素胎牛血清（避免细胞过度活化）、1% 抗菌制剂（预防污染）。培养基 pH 控制在 7.2-7.4，使用前 37℃预热，避免低温刺激影响药物敏感性。

置于 37℃、5% CO?、湿度 95% 以上培养箱：37℃维持细胞代谢与药物敏感性，5% CO?稳定培养基 pH，95% 湿度防止培养基蒸发导致渗透压异常。每日观察细胞状态，轻轻摇晃培养瓶避免细胞沉降，每周用台盼蓝染色检测活力，确保活率≥85%。

细胞密度达 1×10?-2×10?个 /mL 时传代：轻柔吹打均匀，按 1:3-1:5 比例分装至新培养瓶，每 2-3 天传代一次。

冻存选对数生长期细胞（活率≥90%），冻存液为 90% FBS+10% DMSO，梯度降温（4℃30min→-20℃1h→-80℃过夜→液氮保存）。复苏时 37℃水浴融化（≤1 分钟），加 5 倍预热培养基离心去 DMSO，重悬接种后 24 小时不换液，提高存活率。

四、实验使用注意事项