MOLT-4人急性淋巴母细胞性白血病细胞

MOLT-4人急性淋巴母细胞性白血病细胞是从一名 19 岁男性急性淋巴母细胞性白血病（ALL）患者的外周血中分离纯化并建立的永生化白血病细胞系，因精准复刻 T 系急性淋巴母细胞性白血病的形态特征、免疫表型及病理行为，尤其对多种抗白血病药物具典型敏感性、能模拟白血病细胞的增殖与凋亡调控机制，成为研究 T-ALL 发病机制、抗白血病药物筛选、耐药机制探索及相关治疗研发的核心实验模型，为白血病基础研究与临床转化提供了标准化工具。

一、核心生物学特性

MOLT-4 细胞具急性淋巴母细胞的典型形态，在倒置显微镜下观察为圆形或类圆形，细胞质少且呈嗜碱性（因胞内核糖体丰富），细胞核大而圆、占细胞体积的 2/3 以上，核仁明显（1-2 个），染色质呈细颗粒状，与临床 T-ALL 患者骨髓中的白血病细胞形态高度一致。该细胞稳定表达 T 淋巴细胞特异性标志物：CD2（T 细胞活化共受体）、CD3（T 细胞受体复合物核心成分）、CD4（辅助性 T 细胞标志物）、CD7（早期 T 细胞标志物），同时表达白血病相关抗原 CD99，不表达 B 细胞标志物 CD19 及髓系细胞标志物 CD13，明确其 T 系淋巴母细胞的属性，与 T-ALL 的免疫分型特征wan全匹配。

MOLT-4 细胞具白血病细胞的恶性增殖特征：一是高增殖活性，在标准培养条件下种群倍增时间约为 24-30 小时，传代后可快速恢复增殖能力，且长期传代仍能维持稳定的增殖速率；二是锚着非依赖性生长，为wan全悬浮生长细胞系，细胞均匀分散于培养基中，少量可形成松散小聚团（直径≤3 个细胞，不影响活性）；三是药物敏感性，对临床常用抗白血病药物（如长春新碱）高度敏感，药物处理后可出现典型的凋亡特征（如细胞皱缩、染色质凝聚、凋亡小体形成），且凋亡率与药物浓度呈剂量依赖性，这一特性使其成为抗白血病药物活性评价的理想模型。此外，细胞还保留部分 T 淋巴细胞的功能特征，如经 PHA（植物血凝素）刺激后可轻微活化，表达少量 IL-2 受体，模拟白血病细胞的异?；罨刺?/span>

MOLT-4 细胞携带 T-ALL 相关的遗传学改变，如染色体数目异常（多为超二倍体）及部分基因表达异常：如原癌基因 MYC 表达上调（参与细胞恶性增殖调控）、抑癌基因 p53 功能正常（因此对 DNA 损伤类抗白血病药物敏感，p53 通路激活可诱导细胞凋亡），与部分 T-ALL 患者的遗传学特征相似，为研究白血病的分子致病机制提供了遗传学背景明确的模型。

二、主要研究应用场景

MOLT-4 细胞是解析 T-ALL 发病分子机制的核心工具。例如，通过高通量测序对比 MOLT-4 细胞与正常 T 淋巴细胞的基因表达差异，可筛选出 T-ALL 相关的差异表达基因（如 NOTCH1、TLX1），进一步通过基因敲除 / 过表达实验验证其功能 —— 如敲除 NOTCH1 后，MOLT-4 细胞的增殖速率下降 40%、凋亡率升高 30%，明确 NOTCH1 信号通路在 T-ALL 细胞增殖中的驱动作用。此外，利用该细胞研究白血病细胞的代谢重编程机制，发现 MOLT-4 细胞存在糖酵解增强现象（Warburg 效应），通过抑制糖酵解酶（如己糖激酶）可显著抑制细胞增殖，揭示代谢异常在 T-ALL 中的作用，为代谢靶向治疗提供理论基础。

MOLT-4 细胞因药物敏感性明确，广泛应用于白血病抗白血病药物筛选与耐药机制研究。在药物筛选中，通过 CCK-8 法、MTT 法检测候选药物（如新型生物碱类、靶向小分子化合物）对细胞增殖的抑制效果，计算半数抑制浓度（IC50），评估药物活性；例如，对天然产物衍生物进行筛选时，若化合物使 MOLT-4 细胞的 IC50 低于 10μmol/L，且凋亡率超过 50%，则提示其具潜在抗白血病活性。在耐药机制研究中，通过长期低剂量药物诱导建立 MOLT-4 耐药细胞株（如长春新碱耐药株 MOLT-4/VCR），对比耐药株与亲本株的基因表达差异，发现多药耐药基因 MDR1（编码 P - 糖蛋白）表达上调，验证 P - 糖蛋白介导的药物外排是耐药产生的关键机制，为逆转白血病耐药提供靶点（如使用 MDR1 抑制剂维拉帕米可部分恢复耐药细胞的药物敏感性）。

MOLT-4 细胞也用于白血病相关治疗策略的研发与验证，尤其在 CAR-T 细胞治疗领域：因细胞表达 CD3、CD4 等 T 细胞标志物，可作为 CD3 靶向或 CD4 靶向 CAR-T 细胞的体外杀伤靶细胞，通过检测 CAR-T 细胞对 MOLT-4 细胞的杀伤率（如 LDH 释放法、流式细胞术），评估 CAR-T 细胞的活性；例如，CD3 靶向 CAR-T 细胞对 MOLT-4 细胞的杀伤率可达 70% 以上，且能有效抑制细胞增殖，为 CAR-T 细胞治疗的临床前研究提供数据支持。此外，该细胞也用于免疫检查点抑制剂（如 PD-1/PD-L1 抑制剂）的活性评价，检测药物对白血病细胞免疫逃逸的阻断效果。

三、细胞培养关键要点

MOLT-4 细胞常规使用 RPMI-1640 培养基培养，该培养基含细胞增殖所需的必需氨基酸、维生素及微量元素，可满足其高增殖活性的需求；需添加 10%-15% 胎牛血清（FBS，选择低内毒素批次，避免刺激细胞过度活化）、1% 抗菌制剂（预防细菌污染）。培养基 pH 需严格控制在 7.2-7.4，使用前在 37℃水浴锅中预热至室温，避免低温刺激导致细胞应激，影响药物敏感性。

细胞需置于 37℃、5% CO?、湿度 95% 以上的恒温培养箱中培养：37℃为细胞代谢与酶活性的最适温度，可维持正常的增殖速率与药物敏感性；5% CO?通过调节培养基中碳酸氢盐平衡维持 pH 稳定，避免 pH 异常导致细胞形态改变；95% 湿度可防止培养基过度蒸发，避免渗透压升高导致细胞脱水。培养过程中需每天观察细胞状态，轻轻摇晃培养瓶使细胞均匀分布，避免细胞沉降导致局部密度过高；通过台盼蓝染色法每周检测 1-2 次细胞活力，确?；盥饰衷?85% 以上，活力过低会影响实验结果的重复性。

传代时机选择细胞密度达到 1×10?-2×10?个 /mL 时（密度过高易导致营养匮乏、活力下降）：将培养瓶中的细胞悬液轻轻吹打均匀（力度需轻柔，避免损伤细胞），按 1:3-1:5 的比例转移至新培养瓶，加入新鲜培养基后放回培养箱（悬浮细胞无需消化，直接分装即可），每 2-3 天传代一次。

冻存需选用对数生长期且活力良好的细胞（活率≥90%），冻存液为 90% FBS+10% DMSO（DMSO 可降低细胞内冰晶形成，减少冻存损伤）；将细胞悬液与冻存液按 1:1 混合均匀，分装至冻存管并标注细胞名称、代次、冻存日期；遵循梯度降温程序：4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃过夜→转入液氮长期保存。复苏时，冻存管从液氮取出后快速放入 37℃水浴融化（时间不超过 1 分钟，避免细胞长时间低温损伤）；加入 5 倍体积预热的培养基，1000rpm 离心 5 分钟去除 DMSO（DMSO 对细胞有一定毒性）；弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞后接种到培养瓶中，复苏后 24 小时内不换液，让细胞充分适应环境，提高存活率。

四、实验使用注意事项