NAMALWA人Burkitt's淋巴瘤细胞

NAMALWA人Burkitt's淋巴瘤细胞是由研究者从一名非洲 Burkitt's 淋巴瘤患者的肿瘤组织中分离建立的人 Burkitt's 淋巴瘤细胞系，因稳定携带 Epstein-Barr 病毒（EB 病毒，EBV）基因组，且高度模拟临床 Burkitt's 淋巴瘤的病理特征与分子背景，成为全球 Burkitt's 淋巴瘤基础研究、EB 病毒致癌机制探索及抗肿瘤药物研发的核心实验模型，为破解 EB 病毒相关淋巴瘤治疗难题提供了关键支撑。

一、核心生物学特性

作为典型的 Burkitt's 淋巴瘤细胞系，NAMALWA 具备 Burkitt's 淋巴瘤的标志性病理表型，可稳定表达 B 淋巴细胞分化标志物，如 CD19、CD20、CD22，同时表达 B 细胞活化标志物 CD38，不表达 T 细胞标志物 CD3、CD4、CD8，与临床 Burkitt's 淋巴瘤患者肿瘤细胞的免疫表型wan全一致。在倒置显微镜下观察，细胞呈圆形或类圆形，体积中等，细胞质丰富且透亮，细胞核大而圆，核仁明显（1-2 个），核质比高；生长方式为wan全悬浮生长，细胞均匀分散于培养基中，无贴壁特性，传代时无需消化，仅需通过轻柔吹打使细胞悬液均匀，按比例分装即可，操作简便且能维持细胞良好状态。

NAMALWA 最核心的特征是携带 EB 病毒基因组—— 该细胞系中的 EB 病毒为潜伏感染状态，病毒基因组稳定整合于宿主细胞染色体中，可持续表达 EB 病毒潜伏相关蛋白（如 EBNA-1、LMP-2），但不表达病毒裂解期蛋白，与临床 EB 病毒阳性 Burkitt's 淋巴瘤的病毒感染模式高度契合。此外，NAMALWA 还存在 Burkitt's 淋巴瘤典型的c-MYC 基因重排：该基因因染色体易位（常见 t（8；14））导致表达失控，持续激活下游增殖信号通路，驱动细胞异常增殖，是 Burkitt's 淋巴瘤发生发展的关键驱动事件。这两种核心分子特征的叠加，使 NAMALWA 成为研究 EB 病毒与 c-MYC 协同致癌机制的理想模型，避免单一分子背景导致的研究局限性。

在标准培养条件下，NAMALWA 的种群倍增时间约为 36-48 小时，增殖速率较快，细胞活力稳定（常规培养时活率可达 85%-90%）。当细胞密度达到 1×10?-2×10?个 /mL 时进入对数生长期，此时细胞形态均一、代谢活跃，且 EB 病毒潜伏蛋白表达与 c-MYC 活性稳定，是开展药物处理、病毒机制研究、基因编辑等实验的最佳时期；若细胞密度过高（超过 3×10?个 /mL），易出现营养匮乏、代谢废物堆积，导致细胞活力下降、凋亡率升高，因此需及时传代（建议每 1-2 天传代一次）以维持细胞生物学特性稳定。

二、主要研究应用场景

依托稳定携带 EB 病毒基因组的特性，NAMALWA 成为解析 EB 病毒致癌机制的核心工具。例如，通过 RNA 干扰技术下调细胞中 EB 病毒潜伏蛋白 EBNA-1 的表达，可观察到细胞增殖速率显著减缓、染色体稳定性提升，进而明确 EBNA-1 在维持病毒基因组稳定、促进宿主细胞增殖中的关键作用；此外，利用 NAMALWA 研究 EB 病毒与 c-MYC 的协同作用，发现 EB 病毒潜伏蛋白可通过激活 NF-κB 信号通路，增强 c-MYC 的致癌效应，加剧细胞恶性程度，这一机制的阐明为 EB 病毒关联淋巴瘤的靶向治疗提供了理论依据。同时，NAMALWA 也常用于 EB 病毒潜伏感染向裂解感染转化的机制研究，通过筛选诱导病毒裂解的药物（如丙二醇甲醚醋酸酯），为 “病毒靶向治疗"（如裂解病毒联合hua疗）提供实验支持。

NAMALWA 因同时具备 c-MYC 重排与 EB 病毒感染特征，广泛应用于 Burkitt's 淋巴瘤靶向药物的筛选与活性验证，尤其适用于针对 c-MYC、EB 病毒潜伏蛋白的药物研发。在药物筛选实验中，可通过 CCK-8 法检测候选药物对细胞增殖的抑制效果，计算半数抑制浓度（IC50），初步评估药物活性；对于针对 c-MYC 的药物，可通过 Western blot 检测药物处理后 c-MYC 蛋白表达水平变化，或通过实时荧光定量 PCR 检测其下游靶基因（如 Cyclin D1）的表达，验证药物对靶点通路的抑制作用；针对 EB 病毒的药物，则可检测病毒潜伏蛋白表达或病毒基因组复制情况，评估药物抗病毒效果。此外，通过建立 NAMALWA 裸鼠移植瘤模型，可在体内验证药物的抗肿瘤效果（如肿瘤体积缩小率、小鼠生存期延长情况），为药物临床转化提供关键的体内外数据支持。

Burkitt's 淋巴瘤临床治疗中易出现耐药复发，NAMALWA 是建立耐药细胞株、研究耐药机制的重要载体。通过逐步提高药物浓度（如临床常用的环lin酰胺、阿mei素）诱导该细胞系建立耐药细胞株（如 NAMALWA/DR），对比敏感株与耐药株的基因表达谱（如 RNA 测序）、蛋白水平变化（如 Western blot），可挖掘耐药相关分子。研究发现，耐药株中常出现 ABC 转运蛋白（如 ABCB1、ABCG2）高表达、DNA 损伤修复基因（如 BRCA1、ATM）激活或 c-MYC 下游通路重构等耐药机制 ——ABC 转运蛋白可将细胞内药物泵出体外，降低胞内药物浓度；DNA 损伤修复基因激活可增强细胞对药物诱导损伤的修复能力；通路重构则可通过激活替代信号通路，绕过药物作用靶点驱动细胞增殖。针对这些机制，可筛选相应的抑制剂（如 ABC 转运蛋白抑制剂维拉帕米、DNA 损伤修复抑制剂奥拉帕利），并在 NAMALWA 模型中验证其逆转耐药的效果，为临床耐药患者的治疗提供新策略。

三、细胞培养关键要点

NAMALWA 常规使用 RPMI-1640 培养基进行培养，该培养基营养成分均衡，可满足细胞快速增殖与 EB 病毒潜伏状态稳定的需求；需添加 10%-15% 胎牛血清（FBS，经 56℃热灭活 30 分钟，去除补体成分对细胞的潜在损伤），为细胞提供生长所需的营养物质与细胞因子（如 IL-6、IL-10）；为预防细菌污染，可加入适量抗菌制剂。培养基的 pH 值需严格控制在 7.2-7.4 之间，使用前需在 37℃水浴锅中预热至室温，避免低温刺激导致细胞应激损伤，影响 EB 病毒潜伏蛋白表达与 c-MYC 活性。

细胞需置于 37℃、5% CO?、湿度 95% 以上的恒温培养箱中培养：37℃为细胞代谢与酶活性的最适温度，可维持 EB 病毒潜伏感染状态与 c-MYC 的正常功能；5% CO?通过调节培养基中碳酸氢盐的平衡，维持 pH 值稳定，避免 pH 异常影响细胞生长；95% 以上的湿度可防止培养基过度蒸发，避免渗透压改变导致细胞脱水或肿胀。培养过程中需每天观察细胞状态，轻轻摇晃培养瓶使细胞均匀分布，避免细胞沉降导致局部密度过高、营养不足。

当细胞密度达到 1×10?-2×10?个 /mL 时进行传代：将培养瓶中的细胞悬液轻轻吹打均匀，按 1:3-1:5 的比例转移至新的培养瓶中，加入新鲜培养基，置于培养箱中继续培养（悬浮细胞无需消化，直接分装即可）。

冻存时需选用对数生长期且分子特征稳定的细胞（确保 EB 病毒潜伏状态与 c-MYC 重排正常），采用 90% FBS+10% DMSO 的混合液作为冻存液（DMSO 可降低细胞内冰晶形成，减少冻存损伤）；将细胞悬液与冻存液按 1:1 比例混合均匀，分装至冻存管中，标注细胞名称、冻存日期与代次；冻存过程需遵循梯度降温原则：4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃过夜→转入液氮中长期保存（液氮温度为 - 196℃，可长期维持细胞活性与分子特征）。复苏时，将冻存管从液氮中取出，快速放入 37℃水浴锅中，轻轻摇晃至液体wan全融化（时间不超过 1 分钟，避免细胞长时间处于低温环境）；随后将细胞悬液转移至离心管中，加入 5 倍体积的预热培养基，1000rpm 离心 5 分钟，去除 DMSO（DMSO 对细胞有一定毒性）；弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞后接种到培养瓶中，复苏后 24 小时内避免换液，让细胞充分适应环境，提高存活率。

四、实验使用注意事项