NCI-H1975人肺腺癌细胞

NCI-H1975人肺腺癌细胞是由美国国家癌症研究所（NCI）建立的人肺腺癌细胞系，源自一名晚期肺腺癌患者的肿瘤组织。因携带表皮生长因子受体（EGFR）T790M/L858R 双突变这一标志性分子特征，且生物学特性稳定，成为全球肺癌领域研究 EGFR 靶向治疗耐药机制、开发新一代靶向药物的核心实验模型，为解决临床肺癌治疗耐药难题提供了关键支撑。

一、核心生物学特性

作为典型的肺腺癌细胞系，NCI-H1975 具备肺腺癌的经典病理表型，可表达肺腺癌特异性标志物（如细胞角蛋白 7、甲状腺转录因子 1），与临床 EGFR 突变型肺腺癌患者的肿瘤组织高度吻合。在倒置显微镜下，细胞呈多边形或上皮样形态，细胞质丰富且边界清晰，细胞核大而饱满，核仁明显，核质比高于正常肺上皮细胞；生长方式为贴壁生长，细胞紧密附着于培养皿表面，呈 “铺路石" 样均匀排列，传代时需通过消化处理使细胞脱离基质，分散成单细胞悬液。

NCI-H1975 最核心的分子特征是EGFR T790M/L858R 双突变：L858R 突变属于 EGFR 激活突变，可导致 EGFR 信号通路持续激活，驱动细胞异常增殖；而 T790M 突变是临床 EGFR 第一代靶向药物（如吉非ti尼）耐药的主要机制，通过改变 EGFR 蛋白结构，降低药物与靶点的结合能力。此外，该细胞系还存在 TP53 基因突变，可进一步加剧细胞凋亡机制紊乱，增强肿瘤细胞的恶性程度。同时，NCI-H1975 不携带间变性淋巴瘤激酶（ALK）、ROS1 等其他肺癌常见融合基因，确保了其作为 EGFR 双突变型肺腺癌模型的特异性。

在标准培养条件下，NCI-H1975 的种群倍增时间约为 48-60 小时，增殖速率适中，细胞活力稳定（常规培养时活率可达 85%-90%）。当细胞融合度达到 80%-90% 时进入对数生长期，此时细胞形态均一、增殖活跃，且 EGFR 突变相关信号通路活性稳定，是开展药物敏感性检测、基因编辑、信号通路分析等实验的最佳时期；若细胞融合度过高（超过 95%），易出现接触抑制，导致部分细胞凋亡或 EGFR 信号通路活性异常，因此需及时传代以维持细胞良好状态。

二、主要研究应用场景

凭借 EGFR T790M/L858R 双突变特征，NCI-H1975 成为解析肺癌靶向耐药机制的黄金模型。例如，通过对比该细胞在 EGFR 第一代药物（吉非ti尼）处理前后的基因表达变化，可发现药物诱导下细胞内 ABC 转运蛋白表达升高、MET 基因扩增等代偿性耐药机制；此外，利用该细胞系研究 T790M 突变对 EGFR 蛋白结构与功能的影响，可明确其导致药物结合能力下降的分子机制，为开发能突破 T790M 突变的新一代靶向药物提供理论依据。同时，NCI-H1975 也常用于耐药逆转研究，通过筛选能抑制 T790M 突变 EGFR 活性的小分子化合物，探索逆转耐药的新策略。

NCI-H1975 是全球药企开发 EGFR T790M 突变靶向药物的核心筛选模型。在药物研发中，可通过 MTT 法、CCK-8 法检测候选药物对该细胞增殖的抑制效果，计算半数抑制浓度（IC50），初步评估药物对 EGFR 双突变型肺癌的活性；对于进入临床前研究的药物，还可通过 Western blot 检测药物对 EGFR 及其下游信号分子（如 AKT、ERK）磷酸化水平的影响，验证药物对靶点通路的抑制作用；此外，通过建立 NCI-H1975 裸鼠移植瘤模型，可在体内验证药物的抗肿瘤效果，为药物临床转化提供关键数据。例如，临床常用的 EGFR 第三代靶向药物奥希替尼，其早期研发阶段便以 NCI-H1975 为核心模型，验证了对 T790M 突变的抑制活性。

NCI-H1975 也是研究 EGFR 信号通路调控机制的理想工具。例如，通过 RNA 干扰技术下调该细胞中 EGFR 下游关键分子（如 PI3K、MEK）的表达，可观察到细胞增殖速率减缓、凋亡率升高，明确 EGFR-PI3K-AKT、EGFR-RAS-ERK 通路在肺腺癌细胞生长中的核心作用；此外，利用该细胞系研究缺氧、炎症因子等微环境因素对 EGFR 信号通路的影响，可揭示肿瘤微环境与靶向治疗敏感性的关联，为制定联合治疗方案提供参考。

三、细胞培养关键要点

NCI-H1975 常规使用 RPMI-1640 培养基培养，需添加 10% 胎牛血清（FBS，经 56℃热灭活 30 分钟，去除补体成分对细胞的影响），为细胞提供营养物质与生长因子；同时加入适量抗菌试剂预防细菌污染。培养基 pH 值需严格控制在 7.2-7.4 之间，使用前在 37℃水浴锅中预热至室温，避免低温刺激影响细胞活性与 EGFR 信号通路稳定性。

细胞需置于 37℃、5% CO?、湿度 95% 以上的恒温培养箱中培养：37℃维持细胞代谢与酶活性，确保 EGFR 信号通路正常运行；5% CO?通过调节培养基中碳酸氢盐的平衡，维持 pH 值稳定；95% 以上的湿度可防止培养基过度蒸发，避免渗透压改变影响细胞生长。培养过程中需定期检查培养箱参数，尤其避免温度波动导致细胞形态与分子特征异常。

当细胞融合度达到 80%-90% 时进行传代：先用 PBS 缓冲液轻轻洗涤细胞 2 次，去除残留血清与代谢废物；加入适量消化液，37℃孵育 1-2 分钟，在显微镜下观察到细胞边缘收缩、变圆后，立即加入含血清培养基终止消化；用移液器轻柔吹打细胞，避免用力过猛损伤细胞，制成单细胞悬液；按 1:3-1:5 的比例接种到新培养皿中，加入新鲜培养基，置于培养箱中继续培养。

冻存时需选用对数生长期的细胞（确保 EGFR 突变特征稳定），冻存液为 90% FBS+10% DMSO；将细胞悬液与冻存液混合均匀后分装冻存管，标注细胞名称、冻存日期与代次；遵循梯度降温原则（4℃30 分钟→-20℃1 小时→-80℃过夜→液氮保存），减少冻存损伤。复苏时，冻存管快速放入 37℃水浴锅中融化（时间不超过 1 分钟），加入 5 倍体积预热培养基，1000rpm 离心 5 分钟去除 DMSO，用新鲜培养基重悬后接种，复苏后 24 小时内避免换液，提高细胞存活率。

四、实验使用注意事项