NCM460人正常肠上皮细胞

NCM460人正常肠上皮细胞是肠道生物学与医学研究领域的重要正常细胞模型，源自健康人体的正常结肠黏膜组织，经体外分离、纯化及标准化培养建立。该细胞完整保留体内正常肠上皮细胞的核心生理功能与表型特征，无恶性增殖属性，体外培养稳定性高，传代 40 代以内仍维持肠上皮特异性功能，成为研究肠道生理代谢、肠屏障功能、肠毒性评估及肠道疾病病理机制的理想工具，为基础肠道研究与肠道疾病临床转化提供可靠的体外实验载体。

一、核心生物学特性

（一）组织来源与细胞属性

NCM460 细胞源自人结肠正常黏膜上皮组织，与体内正常肠上皮细胞的生理特征、遗传背景高度一致。作为非肿瘤源性的正常上皮细胞系，其核心优势体现在三方面：一是功能真实性，严格保留肠上皮细胞te有的屏障功能、物质吸收与分泌功能，可精准模拟人体肠道的生理环境与功能状态，实验结果对人体肠道相关研究的参考价值更高；二是遗传稳定性，长期传代仍维持正常二倍体核型，无染色体异常或基因突变，同一批次与不同批次间实验结果重复性达 90% 以上；三是培养适应性，虽为正常体细胞，但体外增殖能力稳定，无需添加复杂生长因子即可维持活性，克服了原代肠上皮细胞培养周期短（仅 2-3 天）、易脱落的问题，可满足长期实验需求。

（二）形态与生长特征

体外培养时，NCM460 细胞以贴壁生长为主，呈现典型的肠上皮细胞形态特征：细胞呈多边形或柱状，排列紧密呈 “铺路石样"（模拟体内肠上皮细胞的单层排列结构），胞质均匀透亮，部分细胞可见细小的胞质颗粒（为肠上皮细胞内的消化酶原颗?；蜃颂逑喙亟峁梗胛辗置诠δ芟喙兀?；细胞核呈圆形或椭圆形，位于细胞基部，核仁清晰（1 个），染色质分布均匀，分裂象较少（倍增时间约 48-72 小时），符合正常肠上皮细胞的生长节奏。

细胞生长具有明显的 “接触抑制" 与 “极性生长" 特征：当汇合度达 90% 以上时，增殖速率显著减缓，形成连续的单层细胞层，且细胞会逐渐展现极性（顶端朝向培养基表面，基底侧贴附培养瓶），模拟体内肠上皮的极性结构。常规接种密度以 3×10?-5×10? cells/cm2 为宜，接种后 24 小时开始贴壁，48 小时贴壁率达 90% 以上，72-96 小时进入对数生长期，120-144 小时汇合度可达 85%-90%，需及时传代以避免细胞因过度汇合出现功能退化（如屏障功能下降）。

（三）分子表型与功能特性

分子层面，NCM460 细胞呈现人正常肠上皮细胞te有的表型：一是高表达肠上皮特异性标志物，如细胞角蛋白 20（CK20，肠上皮细胞特征蛋白）、绒毛蛋白（Villin，肠绒毛上皮细胞特异性蛋白）、紧密连接蛋白（ZO-1、occludin，维持肠屏障功能的关键蛋白），阳性率均达 85% 以上，可通过免疫荧光、Western blot 验证细胞身份；二是稳定表达肠道功能相关分子，如蔗糖酶 - 异麦芽糖酶（消化吸收相关酶）、钠 - 葡萄糖转运体 1（SGLT1，物质转运蛋白）、黏液蛋白 2（MUC2，肠道黏液分泌相关蛋白），这些分子的表达与活性接近体内正常肠上皮细胞，是其功能研究的核心基础。

功能上，该细胞具备正常肠上皮细胞的三大核心生理功能：一是肠屏障功能，汇合后形成紧密的单层细胞屏障，通过跨上皮电阻值（TEER）检测可达 200-300 Ω?cm2（反映屏障完整性），且能有效阻止大分子物质（如荧光su钠）透过，模拟体内肠道的物理屏障作用；二是吸收功能，可通过 SGLT1 等转运体吸收葡萄糖、氨基酸等小分子营养物质，吸收效率可通过放射性同位素标记或荧光检测量化，反映肠道的物质吸收能力；三是分泌功能，能分泌黏液蛋白（MUC2）与抗菌物质（如防御素），黏液层可通过阿尔辛蓝染色观察，抗菌物质分泌量可通过 ELISA 检测，模拟肠道的黏膜?；び朊庖叻烙δ堋?/span>

二、体外培养与操作规范

（一）基础培养体系配置

NCM460 细胞对培养条件要求中等，需针对性配置培养基以维持肠上皮功能：

（二）传代与功能维持操作

传代时机：当细胞汇合度达 85%-90% 时需及时传代（通常每 5-6 天一次），避免过度汇合导致细胞极性丢失与屏障功能下降（TEER 值低于 150 Ω?cm2）。传代比例按 1:2-1:3 稀释，稀释比例不宜过高（低于 1:4 易导致细胞密度过低，难以形成极性）。

传代步骤：

功能维持要点：长期传代易导致细胞屏障功能与吸收功能下降，需每 8 代检测一次 TEER 值（确保≥200 Ω?cm2）与葡萄糖吸收效率（确?！菡Ｋ降?80%）；若功能下降，可在培养基中添加 5ng/mL 表皮生长因子（EGF，轻度激活肠上皮修复信号）培养 24 小时，促进功能恢复；同时避免频繁更换血清批次，每次更换后需适应培养 2-3 代，待细胞功能稳定后再用于实验。

（三）冻存与复苏要点

冻存准备：选择对数生长期、功能正常的细胞（活力≥90%，TEER 值≥200 Ω?cm2），冻存液按 “10% DMSO+20% 胎牛血清 + 70% DMEM/F12 培养基" 配制，全程在冰浴中操作，DMSO 缓慢滴加并轻柔混匀，防止温度骤降导致细胞结冰损伤。

冻存流程：将细胞消化为单细胞悬液后离心（1000×g，5 分钟），弃上清；用预冷冻存液重悬细胞，调整浓度为 6×10?-8×10? cells/mL（高于普通细胞冻存浓度，提升复苏成功率），分装至冻存管；采用程序降温法：4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃放置 12 小时→转入液氮长期保存，也可使用程序降温盒直接置于 - 80℃，简化操作流程。

复苏操作：从液氮取出冻存管后，立即放入 37℃水浴快速解冻（60-90 秒内wan全融化）；将细胞悬液缓慢加入 10 倍体积预热的含血清培养基，轻轻混匀后离心（1000×g，5 分钟）去除 DMSO；用新鲜培养基重悬细胞并接种至培养瓶，培养 24 小时后更换培养基，去除死细胞与残留 DMSO；复苏后 48 小时细胞活力可恢复至 85% 以上，72 小时后开始形成单层，一周后需检测 TEER 值与功能指标，确保无显著损伤后再开展实验。

三、主要研究应用场景

（一）肠道生理与功能机制研究

NCM460 细胞是解析人体肠道基础生理功能的理想工具：

（二）肠毒性评估与药物筛选

依托其正常肠上皮属性，该细胞广泛用于肠毒性评估与肠道相关药物研发：

（三）肠道疾病模型构建与机制研究

NCM460 细胞可用于构建体外肠道疾病模型，研究疾病机制与治疗策略：