RAG小鼠肾腺癌细胞

RAG小鼠肾腺癌细胞是研究小鼠肾脏腺癌及肾癌相关机制的重要体外模型，源自 RAG（Recombination Activating Gene）敲除小鼠的肾脏腺癌组织，因能稳定保留小鼠肾腺癌的恶性生物学特征，且适配免疫缺陷背景下的体内外实验，在肾癌发病机制解析、药物敏感性测试及肿瘤微环境研究中应用广泛，为小鼠肾癌相关研究提供关键实验载体。

一、核心生物学特性

细胞来源上，该细胞系分离自 RAG 敲除小鼠自发或诱导产生的肾脏腺癌组织，经体外培养建系后，持续保留肾腺癌的组织学与分子特征。形态上，RAG 小鼠肾腺癌细胞呈典型上皮样形态，体外培养以贴壁生长为主，细胞排列呈不规则多边形或梭形，胞质丰富，细胞核大且核仁清晰，部分细胞可见多核现象，符合肾脏腺癌细胞的形态特征，同时因 RAG 基因敲除背景，细胞自身免疫相关通路存在缺陷，更易适配免疫缺陷小鼠的移植瘤实验。

功能特性方面，RAG 小鼠肾腺癌细胞具备肾腺癌的恶性生物学行为：增殖能力较强，细胞周期中 G2/M 期占比略高于正常肾上皮细胞，体外培养 3-4 天可达到对数生长期；具有一定的侵袭与迁移能力，可通过分泌基质金属蛋白酶（如 MMP-2、MMP-9）降解细胞外基质，模拟体内肾癌的浸润生长过程；同时表达肾脏腺癌相关标志物，如细胞角蛋白 18（CK18）、碳酸酐酶 IX（CAIX），以及肿瘤相关抗原（如 CD44），这些标志物为细胞鉴定、肾癌靶向实验提供明确靶点，且其 RAG 基因敲除特性可避免细胞自身免疫相关基因干扰，适合开展免疫调控相关研究。

二、体外培养关键条件

基础培养基选择以 DMEM 高糖培养基为主，需添加 10% 胎牛血清以补充生长必需的营养成分（如氨基酸、生长因子），满足细胞对能量与信号分子的需求，同时加入 1% 无菌防护试剂预防细菌污染。培养基 pH 需通过 NaHCO?调节至 7.2-7.4，渗透压控制在 280-320mOsm/kg，可额外添加 5mM 谷an酰胺，增强细胞代谢稳定性，避免因营养匮乏影响细胞活性。

培养环境需严格控制为 37℃、5% CO?的恒温恒湿条件，培养箱内湿度保持在 95% 以上，防止培养基因水分蒸发导致渗透压升高。因细胞贴壁生长，传代时需先用细胞消化试剂处理，待细胞间隙增大、形态变圆后，加入含血清的培养基终止消化，轻轻吹打制成细胞悬液，按 1:2-1:3 的比例接种至新培养瓶，传代周期通常为 3-4 天，需在细胞汇合度达到 80%-90% 时进行传代，避免细胞过度密集导致接触抑制，影响增殖活性。

细胞维护过程中，每日需通过倒置显微镜观察细胞状态：若发现细胞形态变圆、脱壁增多，或培养基出现浑浊、颜色变黄速度异常，可能提示细胞活力下降或污染；若细胞生长缓慢，可检查血清质量或调整培养温度。细胞冻存时，需使用含 10% 二甲基亚砜（DMSO）的胎牛血清作为冻存液，梯度降温（4℃ 30 分钟→-20℃ 1 小时→-80℃过夜→液氮保存），复苏时快速解冻并立即加入培养基，减少 DMSO 对细胞的损伤，提高复苏存活率。

三、主要实验应用场景

在小鼠肾癌发病机制研究中，RAG 小鼠肾腺癌细胞是理想模型?？蒲腥嗽笨赏ü虮嗉际酰ㄈ?CRISPR-Cas9）敲除或过表达肾癌相关基因（如 VHL、MET），观察细胞增殖、凋亡及侵袭能力的变化，探究基因在肾癌发生发展中的调控作用；也可通过转录组测序、蛋白质组学分析，筛选肾腺癌相关的差异表达基因与蛋白（如 HIF-1α、VEGF），解析肾癌的分子通路，为肾癌机制研究提供理论支撑。

药物研发领域，该细胞应用广泛。可将不同浓度的肾癌治疗药物作用于细胞，通过 MTT 法、CCK-8 法检测细胞活力，计算半数抑制浓度（IC50），评估药物对肾腺癌细胞的杀伤效果；也可构建药物耐药细胞株，研究耐药相关基因（如 ABCB1、BCL-2）的表达变化，探究肾癌耐药机制，为逆转耐药提供实验依据。同时，因细胞源自 RAG 敲除小鼠，可直接接种至同背景免疫缺陷小鼠体内，构建肾癌移植瘤模型，评估药物在体内的疗效，缩短模型构建周期。

在肿瘤微环境研究中，RAG 小鼠肾腺癌细胞可用于探究免疫细胞与肿瘤细胞的相互作用。通过与 T 细胞、巨噬细胞共培养，模拟体内肿瘤微环境，观察免疫细胞对肿瘤细胞增殖、侵袭的影响；也可研究细胞因子（如 IL-6、TGF-β）对肿瘤微环境的调控作用，为肾癌免疫相关治疗研究提供实验平台。此外，细胞还可用于肾癌诊断标志物的筛选与验证，通过检测细胞分泌的蛋白或表面标志物，为肾癌早期诊断提供潜在靶点。

四、实验应用注意事项

实验前需通过免疫荧光或 Western blot 验证细胞标志物（CK18、CAIX）的表达水平，确保细胞特性稳定，避免因细胞传代次数过多导致表型改变，影响实验结果的可靠性；不同批次胎牛血清成分存在差异，可能影响细胞生长与药物反应，建议固定血清品牌，并通过预实验验证其适用性。

贴壁细胞消化过程需严格控制，消化试剂作用时间过长易损伤细胞，过短则细胞消化不充分，建议在显微镜下观察，待细胞边缘收缩、间隙增大时立即终止消化。操作时需严格无菌，定期检测细胞是否存在支原体污染，若发现污染需及时丢弃，避免交叉感染。

结果解读需结合细胞的 RAG 敲除背景，该细胞因免疫相关基因缺陷，其生物学行为与正常小鼠肾腺癌细胞存在差异，实验结论不可直接推广至免疫健全小鼠的肾癌模型，需结合免疫健全小鼠来源的肾腺癌细胞或临床样本数据综合分析，确保研究结果的全面性与相关性。