WERI-Rb-1人视网膜神经胶质瘤细胞

WERI-Rb-1人视网膜神经胶质瘤细胞是体外研究视网膜神经胶质瘤（ retinoblastoma，RB，又称视网膜母细胞瘤）发病机制、药物筛选及治疗策略优化的核心细胞模型，源自视网膜神经胶质瘤患者的肿瘤组织，经体外分离培养与鉴定后，保留了视网膜神经胶质瘤细胞的核心生物学特征，兼具恶性肿瘤细胞的增殖属性与视网膜神经细胞的部分表型，为眼部恶性肿瘤领域的基础研究与临床转化提供了可靠实验材料，在眼科肿瘤研究中应用广泛且科研价值显著。

从细胞来源与生物学特性来看，该细胞分离自儿童视网膜神经胶质瘤患者的病变眼组织，视网膜神经胶质瘤作为儿童最常见的眼部恶性肿瘤，起源于视网膜原始神经上皮细胞，具有明确的遗传关联性（常与 RB1 基因突变相关），而 WERI-Rb-1 细胞高度还原了其来源肿瘤的病理属性。在形态上，WERI-Rb-1 人视网膜神经胶质瘤细胞呈圆形或多边形，胞体大小较均匀，部分细胞可见短突起，细胞核大而圆，核仁明显，染色质分布不均，细胞质少而呈嗜碱性，体外培养时以贴壁生长为主，部分细胞可形成松散的细胞团，这一形态特征与临床视网膜神经胶质瘤肿瘤细胞的病理形态高度吻合，便于通过光学显微镜观察判断细胞生长状态与病变特征。在分子特征方面，该细胞携带视网膜神经胶质瘤典型的 RB1 基因突变，这是视网膜神经胶质瘤发病的关键分子机制，通过基因测序、Western blot 等技术可检测到 RB1 基因表达异?；虻鞍坠δ苋笔?，同时可能伴随 MYC、p53 等肿瘤相关基因的表达改变，为研究视网膜神经胶质瘤的分子发病机制提供了精准模型。此外，该细胞还具备视网膜神经细胞的部分表型特征，表达神经细胞特异性标志物，如神经元特异性烯醇化酶（NSE）、视网膜特异性转录因子（CRX）等，通过免疫荧光染色可明确其细胞来源属性，同时不表达上皮细胞（如细胞角蛋白）、胶质细胞（如 GFAP）相关标志物，确保细胞纯度与实验特异性。

在培养条件与操作要点方面，WERI-Rb-1 人视网膜神经胶质瘤细胞对培养环境要求较为精细，需模拟眼部肿瘤细胞的生长微环境。培养基推荐使用含 10%-15% 胎牛血清（FBS）的 RPMI-1640 培养基，该培养基含丰富的氨基酸、维生素及核苷酸，能满足贴壁肿瘤细胞的能量与营养需求，胎牛血清可提供生长因子（如 EGF、bFGF）、细胞因子及黏附蛋白，促进细胞活性维持与恶性增殖特性保留；培养环境需严格控制在 37℃、5% CO?的恒温培养箱中，CO?浓度可稳定培养基 pH 值在 7.2-7.4 的适宜范围，避免 pH 波动影响细胞代谢与增殖。传代操作时，需密切观察细胞融合度，当细胞融合度达到 70%-80% 时进行传代，此时细胞活性最佳，传代后增殖能力稳定。传代前先用磷酸盐缓冲液（PBS）清洗细胞 2-3 次，去除残留培养基与代谢废物，随后加入 0.25% 胰dan白酶 - EDTA 消化液，37℃孵育 1-2 分钟，待细胞形态变为圆形、细胞间隙明显增大时，立即加入含血清的培养基终止消化，轻轻吹打细胞使其分散成单细胞悬液，按 1:2-1:4 的比例接种至新培养瓶中，避免过度吹打导致细胞损伤（尤其需?；は赴黄鸾峁梗?。培养过程中需每 2-3 天更换一次培养基，及时清除细胞代谢产生的乳酸、氨等有害物质，防止其积累抑制细胞生长；同时需严格遵守无菌操作规范，所有操作均在超净工作台内进行，培养基、PBS、消化液等试剂使用前需经过滤除菌处理，定期对培养箱、超净工作台进行清洁消毒，每 1-2 周检测细胞是否存在支原体污染（常用 PCR 法或酶联免疫法），确保细胞培养稳定性。在细胞冻存与复苏方面，冻存液建议使用含 10% 二甲基亚砜（DMSO）、20% 胎牛血清的 RPMI-1640 培养基，将细胞浓度调整为 1×10?-2×10?个 /mL，按梯度降温法处理：4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃过夜，次日转入液氮长期保存，可最da程度减少低温对细胞的损伤；复苏时需将冻存管迅速放入 37℃水浴锅，持续轻轻摇晃至细胞悬液wan全融化（约 1-2 分钟），立即加入 5-10 倍体积的新鲜培养基稀释 DMSO，1000rpm 离心 5 分钟后弃上清，用新鲜培养基重悬细胞接种，复苏后 24 小时内观察细胞贴壁率（通常要求≥70%），确保细胞后续实验可用性。

在功能特点与科研应用领域，WERI-Rb-1 人视网膜神经胶质瘤细胞凭借其贴近临床肿瘤的生物学特性，被广泛应用于视网膜神经胶质瘤发病机制研究、抗肿瘤药物筛选、耐药机制解析及治疗方案优化等方面。在发病机制研究中，该细胞是解析视网膜神经胶质瘤分子病理机制的重要工具，研究人员可通过基因编辑技术（如 CRISPR-Cas9）修复或突变 RB1 基因，观察细胞增殖、凋亡、分化状态的变化，明确 RB1 基因在肿瘤发生中的调控作用；同时可通过转录组学、蛋白质组学技术，筛选细胞中异常表达的信号通路（如 PI3K-AKT-mTOR、MAPK 通路），解析这些通路在肿瘤细胞增殖、侵袭中的作用机制，为寻找潜在治疗靶点提供实验依据。

在抗肿瘤药物筛选方面，WERI-Rb-1 细胞可用于视网膜神经胶质瘤治疗药物的体外活性评价，涵盖hua疗药物、靶向药物及新型生物制剂。通过 MTT 法、CCK-8 法检测药物对细胞增殖的抑制率，流式细胞术检测药物诱导的细胞凋亡率（如 Annexin V/PI 双染），Transwell 实验、划痕实验评估药物对细胞侵袭与迁移能力的影响，可快速筛选出具有潜在活性的药物；同时可利用该细胞构建药物耐药模型（如长期低剂量药物诱导），研究耐药相关基因（如 ABC 转运蛋白家族、DNA 修复基因）的表达变化，解析耐药机制，为逆转视网膜神经胶质瘤耐药提供新策略。在临床转化研究中，WERI-Rb-1 细胞可用于个体化治疗方案的体外验证，例如将患者来源的肿瘤细胞与该细胞系进行分子特征比对，筛选出可能对患者有效的药物，为临床精准用药提供参考；此外，该细胞还可用于视网膜神经胶质瘤动物模型构建（如裸鼠眼内移植模型、皮下移植模型），通过体内实验观察肿瘤生长情况、药物抑瘤效果及毒副作用，为药物进入临床试验奠定基础。

在眼科基础研究领域，WERI-Rb-1 细胞还可用于探究视网膜神经细胞的分化调控机制，通过加入特定诱导剂（如视huang酸、神经营养因子），观察细胞向成熟视网膜神经细胞（如感光细胞、神经节细胞）分化的过程，检测分化相关标志物的表达变化，为视网膜神经损伤修复研究提供实验模型。同时，该细胞也可用于研究肿瘤微环境对视网膜神经胶质瘤进展的影响，如与视网膜色素上皮细胞、血管内皮细胞共培养，模拟体内肿瘤微环境，分析细胞间相互作用对肿瘤增殖、血管生成的调控作用，为针对肿瘤微环境的治疗研究提供支撑。

综上所述，WERI-Rb-1 人视网膜神经胶质瘤细胞凭借其稳定的恶性生物学特性、明确的分子表型及贴近临床的病理特征，成为视网膜神经胶质瘤研究领域的核心工具，为推动眼部恶性肿瘤机制解析、抗肿瘤药物研发及临床治疗方案优化发挥关键作用，未来在眼科精准医学研究中仍具有广阔的应用前景。