上海乾思生物
生命科学产品一站式供应商
服务热线：021-34556080
生命科学产品一站式供应商
服务热线：021-34556080
产品型号：ELISA?
更新时间：2025-10-28
厂商性质：代理商
访 问 量 ：527
021-34556080
相关文章
NRK大鼠肾细胞
NRK大鼠肾细胞是肾脏研究领域应用广泛的正常细胞模型，源自正常成年大鼠的肾脏皮质组织，主要分离自肾小管上皮细胞群体。该细胞完整保留了肾小管上皮细胞的典型形态结构与生理功能，无肿瘤细胞的恶性增殖特性，在肾脏生理机制解析、药物安全性评估、肾损伤修复研究及肾脏疾病模型构建中发挥着不可替代的作用，为肾脏相关基础研究与临床转化提供了贴近体内生理状态的实验载体。
一、核心生物学特性
（一）组织来源与细胞属性
NRK 细胞来源于大鼠肾脏皮质的肾小管区域，以近曲小管上皮细胞为主，与体内肾小管上皮细胞的组织属性高度匹配。细胞保留了肾小管上皮细胞te
体外培养时，NRK 细胞呈典型上皮样贴壁生长，细胞形态多为多边形或不规则形，胞质均匀且呈嗜酸性，细胞核大而圆润，核仁清晰可见（多为 1 个），染色质分布均匀，分裂象较少，符合正常体细胞的增殖特征。细胞间连接紧密，汇合后形成连续的单层细胞，当汇合度达到 90% 以上时，会出现明显的接触抑制现象，生长速率显著减缓并停止增殖，这一特性是判断其 “正常细胞" 属性的重要标志。
细胞增殖能力温和，倍增时间约为 48-72 小时，传代 30 代以内可维持稳定的形态与生理功能。若传代次数超过 30 代，细胞易出现老化迹象，表现为胞质颗粒增多、细胞伸展变形、增殖速率明显下降。常规接种密度以 3×10?-5×10? cells/cm2 为宜，接种后 24 小时贴壁率可达 85% 以上，48 小时进入对数生长期，72-96 小时汇合度可达到 80%-90%，需及时传代以避免细胞过度密集导致功能退化。
（三）分子表型与功能特性
分子层面，NRK 细胞呈现出肾小管上皮细胞的特异性分子表型：一是高表达上皮细胞标志物，如细胞角蛋白 18（CK18），阳性率可达 95% 以上，可通过免疫荧光染色或 Western blot 技术验证细胞身份；二是表达肾小管功能相关蛋白，如水通道蛋白 1（AQP1）与钠钾 ATP 酶（Na?/K?-ATPase），其中 AQP1 是肾小管重吸收水分的关键蛋白，Na?/K?-ATPase 则负责维持细胞内外离子平衡，二者的表达水平直接反映细胞的重吸收功能活性。
功能上，NRK 细胞具备正常肾小管上皮细胞的核心功能：可主动摄取葡萄糖、氨基酸等小分子物质，模拟体内肾小管的重吸收过程，通过放射性同位素标记法检测葡萄糖摄取率，能直观评估细胞的功能状态；同时，细胞对肾损伤因子（如某些抗生素、化学毒物）高度敏感，在损伤因子作用下，会出现细胞凋亡率升高、AQP1 等功能蛋白表达下降等现象，可精准模拟体内肾损伤过程，为肾毒性机制研究提供可靠模型。
二、体外培养与操作规范
（一）基础培养体系配置
NRK 细胞对培养条件要求较为严格，需精准控制营养成分与环境参数以维持其正常生理功能：
培养基选择：优先使用高糖 DMEM 培养基（含 4.5g/L 葡萄糖、1mM 丙酮酸钠），该培养基能为细胞提供充足的能量与代谢前体，满足肾小管上皮细胞的高代谢需求。若使用低糖 DMEM 培养基，会导致细胞增殖速率下降 40% 以上，且 AQP1 等功能蛋白表达量显著降低；
血清与添加剂：需添加 10%-12% 胎牛血清（应筛选低内毒素、高营养活性的批次，避免血清中杂质影响细胞功能），同时加入 1% 抗菌试剂预防细菌污染。无需额外添加生长因子，细胞可通过自分泌方式维持正常增殖与功能；
培养环境：温度控制在 37℃±0.5℃，CO?浓度维持 5%±0.2%，湿度保持 95%±2%，pH 稳定在 7.2-7.4，渗透压控制在 280-320mOsm/kg。使用普通细胞培养瓶即可，无需特殊涂层（细胞贴壁能力较强），建议每 2-3 天更换一次培养基，避免尿素、肌酐等代谢废物堆积，防止模拟肾损伤环境导致细胞功能异常。
（二）传代与功能维持操作
传代时机：当细胞汇合度达到 80%-90% 时需及时传代（通常每 3-4 天一次），避免过度汇合引发细胞老化。传代比例按 1:2-1:3 稀释，稀释比例过低易导致细胞密度过高，过高则会延长细胞贴壁时间，影响功能恢复。
传代步骤：
弃去旧培养基，用无菌 PBS 轻柔冲洗细胞表面 2 次，动作需缓慢轻柔，避免冲刷损伤细胞表面的微绒毛结构；
加入含 0.02% EDTA 的消化液（按每 25cm2 培养瓶加入 1mL 消化液的比例），37℃孵育 2-3 分钟（正常细胞黏附力较强，需适当延长消化时间）。显微镜下观察到细胞边缘收缩、间隙增大时，立即加入 2-3 倍体积的含血清培养基终止消化；
用移液器轻轻吹打细胞表面，使细胞wan全脱落并分散为单个细胞（力度适中，避免产生气泡破坏细胞结构），收集细胞悬液后离心（1000×g，5 分钟），弃上清后用新鲜培养基重悬，按预设比例接种至新培养瓶。
功能维持要点：长期传代易导致细胞功能退化，需每 8-10 代检测一次细胞功能，如通过 Western blot 检测 AQP1 表达量、放射性同位素法检测葡萄糖摄取率，确保葡萄糖摄取率≥10nmol/mg protein/h、AQP1 阳性率≥85%。若功能下降，可在培养基中添加 5ng/mL 表皮生长因子（EGF）培养 48 小时，促进细胞功能恢复；同时避免频繁更换血清批次，每次更换后需适应培养 2-3 代，待细胞功能稳定后再用于实验。
（三）冻存与复苏要点
冻存准备：选择对数生长期、功能稳定的细胞（活力≥95%，AQP1 阳性率≥85%），确保复苏后细胞功能不受影响。冻存液按 “10% DMSO+20% 胎牛血清 + 70% 高糖 DMEM 培养基" 配制，全程在冰浴中操作，DMSO 需缓慢滴加并轻柔混匀，防止温度骤降损伤细胞线粒体，影响能量代谢功能。
冻存流程：将细胞消化为单细胞悬液后离心（1000×g，5 分钟），弃上清；用预冷冻存液重悬细胞，调整浓度为 6×10?-1×10? cells/mL（高于普通细胞冻存浓度，提升复苏成功率），分装至冻存管；采用程序降温法：4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃放置 12 小时→转入液氮长期保存。
复苏操作：从液氮取出冻存管后，立即放入 37℃水浴快速解冻（60-90 秒内wan全融化）；将细胞悬液缓慢加入 10 倍体积预热的含血清培养基，轻轻混匀后离心（1000×g，5 分钟）去除 DMSO；用新鲜培养基重悬细胞并接种至培养瓶，培养 24 小时后更换培养基，复苏后 72 小时检测细胞活力与 AQP1 表达量，确保细胞功能恢复正常。
三、主要研究应用场景
（一）肾脏生理机制研究
NRK 细胞是解析肾脏正常生理功能的核心工具：
肾小管重吸收机制研究：通过检测细胞对葡萄糖、氨基酸、钠离子的摄取率，结合抑制剂实验（如用乌本苷抑制 Na?/K?-ATPase 活性），可明确肾小管重吸收的分子机制。例如，添加葡萄糖转运体抑制剂根皮苷后，若细胞葡萄糖摄取率下降 70% 以上，可直接验证葡萄糖转运体在肾小管重吸收过程中的关键作用；
肾脏离子平衡调节研究：利用荧光探针（如 Fluo-3 AM）检测细胞内钙离子浓度变化，结合 Western blot 检测离子通道蛋白（如 TRPV5）的表达水平，能深入研究肾脏对钙离子的排泄与重吸收调节机制，为钙代谢紊乱相关肾脏疾?。ㄈ缟鼋崾┑姆⒉』蒲芯刻峁┦笛橐谰?。
（二）药物肾毒性评估
依托对肾损伤因子的敏感性，NRK 细胞是药物肾毒性体外筛选的重要模型：
肾毒性药物筛选：将候选药物（如抗生素、化学药物、中药提取物）与 NRK 细胞共培养，设置不同浓度梯度，通过 CCK-8 法检测细胞活力、流式细胞术检测细胞凋亡率、Western blot 检测 AQP1 与 Na?/K?-ATPase 表达量，计算药物的半数毒性浓度（TC??），高效筛选低肾毒性药物；
肾毒性机制研究：对已明确具有肾毒性的药物，检测其对细胞线粒体功能（如 ATP 生成量、线粒体膜电位）、氧化应激水平（如 ROS 含量、SOD 活性）的影响，可清晰阐明药物导致肾损伤的具体机制（如氧化应激损伤、线粒体功能障碍），为开发肾?；ひ┪锾峁┟魅钒械恪?/span>
（三）肾损伤修复与疾病模型研究
NRK 细胞可用于肾损伤修复机制研究与肾脏疾病模型构建：
肾损伤修复研究：构建体外肾损伤模型（如肾毒性药物诱导损伤），随后加入修复因子（如 EGF、肝细胞生长因子 HGF），通过观察细胞活力恢复情况、AQP1 表达变化及划痕愈合速率（评估细胞迁移能力），能深入研究修复因子促进肾损伤修复的分子机制；
肾脏疾病模型构建：通过基因编辑技术（如 CRISPR/Cas9）敲除或过表达肾脏疾病相关基因（如多囊肾病相关基因 PKD1），可构建体外肾脏疾病模型。观察模型细胞的形态变化（如是否形成囊肿）、功能异常（如重吸收能力下降），能系统研究疾病发生机制；同时在模型中测试候选治疗药物，评估药物对疾病表型的改善效果，为肾脏疾病的临床治疗提供实验数据支持。
Copyright © 2025 上海乾思生物科技有限公司版权所有 备案号：沪ICP备2023041625号-1
技术支持：化工仪器网 管理登录 sitemap.xml
当前位置：
上一个：
返回列表
