人牙周成纤维细胞

人牙周成纤维细胞是构成牙周支持组织的核心功能细胞，主要分布于牙周膜、牙龈固有层及牙槽骨表面，作为牙周组织的 “结构构建者" 与 “修复执行者"，通过合成 extracellular matrix（细胞外基质）、调控组织代谢及参与免疫应答，维持牙周组织的结构稳定与功能平衡。其功能异常是牙周炎等疾病导致牙周组织破坏、牙齿松动的关键原因，同时因可在体外稳定培养并保留核心生物学特性，成为研究牙周疾病机制、开发组织再生疗法及筛选治疗药物的核心实验模型，在口腔医学领域具有不可替代的基础与临床价值。

从细胞来源与组织定位来看，这类细胞的获取主要依托于口腔临床操作中的健康牙周组织 —— 如牙齿正畸拔除的健康牙齿附带的牙周膜、牙龈整形手术切除的正常牙龈组织，或智齿拔除后残留的牙周组织。这些组织经机械研磨、酶解（常用胶原酶）处理后，可分离获得单细胞悬液，再通过贴壁培养法筛选纯化出形态均一的牙周成纤维细胞。在体内，这类细胞广泛分布于牙周组织的关键区域：牙周膜中的成纤维细胞呈梭形，排列与牙周膜纤维束走向一致，直接参与牙周膜胶原纤维的合成与更新；牙龈固有层的成纤维细胞则呈星形或多边形，通过分泌胶原与弹性纤维，维持牙龈组织的弹性与韧性；牙槽骨表面的成纤维细胞还可通过分化为成骨样细胞，参与牙槽骨的修复与改建，形成牙周组织 “牙龈 - 牙周膜 - 牙槽骨" 三位一体的支持网络。

在核心生物学功能方面，这类细胞的作用集中体现在 “结构维持"“损伤修复" 与 “免疫调节" 三大维度。结构维持功能是其最基础的作用 —— 细胞可大量合成并分泌 Ⅰ 型胶原（占牙周膜胶原总量的 90% 以上）、Ⅲ 型胶原、纤维连接蛋白等细胞外基质成分，这些成分相互交织形成致密的纤维网络，将牙齿牢固固定于牙槽骨中，同时为牙周组织中的血管、神经提供支撑框架；此外，细胞还能分泌基质金属蛋白酶（MMPs）等降解酶，通过 “合成 - 降解" 的动态平衡，维持细胞外基质的更新与代谢，确保牙周组织的弹性与适应性。损伤修复功能是其在临床治疗中的核心价值 —— 当牙周组织因炎症、外伤出现损伤时，这类细胞可通过迁移至损伤区域、快速增殖并加速胶原合成，形成修复性纤维组织，同时分泌成骨诱导因子（如骨形态发生蛋白 BMP），诱导牙槽骨再生，促进牙周组织的结构重建；在牙周手术或再生治疗中，这类细胞的活性直接决定了牙周组织的修复效果。免疫调节功能则是其抵御外界刺激的关键 —— 细胞表面表达 Toll 样受体（TLRs）等模式识别受体，可识别细菌脂多糖（LPS，如牙周致病菌牙龈卟啉单胞菌的主要毒力因子），激活后分泌 IL-6、TNF-α 等炎症因子，招募免疫细胞清除病原体，同时通过分泌 IL-10 等抗炎因子，避免炎症过度扩散，维持牙周组织的免疫稳态。

体外培养条件方面，这类细胞的培养体系相对简便，适合口腔实验室常规操作?；∨嘌Ｑ∮酶咛?DMEM 培养基或 α-MEM 培养基，添加 10%-15% 胎牛血清以提供充足的氨基酸、生长因子等营养物质，同时补充青mei素 - 链mei素混合液（100U/mL）预防细菌污染。为维持细胞的增殖活性与功能特性，可适当添加成纤维细胞生长因子（bFGF，5-10ng/mL）或胰岛素（5μg/mL），促进细胞胶原合成能力的保留。培养环境需控制在 37℃恒温、5% CO?浓度的培养箱中，培养基 pH 稳定在 7.2-7.4 之间，湿度保持在 50%-60%，防止培养基过度蒸发导致渗透压改变。细胞呈贴壁生长，接种后 24-36 小时即可完成贴壁，显微镜下观察呈典型的梭形或成纤维细胞样形态，排列呈 “漩涡状"；当细胞融合度达到 80%-90% 时需及时传代，传代时用 0.25% yi酶 - EDTA 混合液消化 2-3 分钟，待细胞间隙增大、形态变圆后，用含血清培养基终止消化，按 1:3-1:4 的比例接种至新鲜培养皿。需注意的是，原代这类细胞体外增殖代数有限（通常为 8-12 代），长期传代易出现胶原合成能力下降或细胞衰老，需及时冻存早期代次细胞；同时，培养过程中需定期通过免疫荧光染色检测 Ⅰ 型胶原表达，验证细胞纯度，避免牙龈上皮细胞、内皮细胞等杂细胞污染影响实验结果。

在科研与临床应用价值上，这类细胞是口腔医学研究的 “多功能工具"，应用覆盖牙周疾病机制解析、再生治疗研发及药物筛选等多个维度。在疾病机制研究中，这类细胞是模拟牙周炎病理过程的理想模型 —— 通过用牙龈卟啉单胞菌 LPS 刺激细胞，可诱导细胞出现炎症反应（如炎症因子高表达、胶原降解酶活性增强），模拟体内牙周炎状态下细胞的功能异常，研究细菌毒力因子对牙周组织的破坏机制，为寻找牙周炎治疗靶点（如抑制 MMPs 活性、调控 TLR 信号通路）提供依据。在再生治疗研发领域，这类细胞是牙周组织工程的核心种子细胞 —— 通过将细胞与生物支架（如胶原支架、羟基磷灰石支架）复合，构建 “细胞 - 支架" 复合物移植到牙周缺损区域，可促进牙周膜再生与牙槽骨修复，目前这一技术已在临床小规模应用，用于治疗中重度牙周缺损。在药物筛选领域，这类细胞可用于评估牙周治疗药物的疗效与安全性 —— 例如，检测中药提取物（如huang芩苷、金银花提取物）对 LPS 诱导的细胞炎症反应的抑制效果，筛选天然抗炎药物；或评估抗生素（如jia硝唑、阿mo西林）对细胞活性的影响，避免药物对牙周正常细胞造成损伤。此外，在口腔材料生物相容性评价中，这类细胞还可用于检测种植牙表面涂层、牙周修复材料对细胞增殖与胶原合成的影响，判断材料是否适合用于牙周临床治疗，为口腔材料的研发与改进提供实验支持。