PLC/PRF/5人肝癌细胞

PLC/PRF/5人肝癌细胞是源自人类原发性肝细胞癌的贴壁生长细胞系，因稳定携带乙型肝炎病毒（HBV）基因组整合片段，且保留肝癌细胞典型恶性特征，成为研究 HBV 相关肝癌机制、病毒 - 宿主互作及肝癌药物筛选的核心体外模型，为肝癌基础研究与临床转化提供关键实验支撑。

一、核心生物学特性

（一）来源与病毒关联特征

该细胞分离自肝癌患者手术切除的肿瘤组织，经体外传代建系后，基因组中稳定整合 HBV DNA 片段（含核心抗原与表面抗原基因），可持续表达 HBsAg、HBeAg 等 HBV 相关抗原，但不产生完整感染性病毒颗粒。这种特性既模拟临床 HBV 感染相关肝癌的分子背景，又降低生物安全风险，是研究 HBV 致肝癌机制的理想工具。

（二）形态与增殖特性

细胞呈多边形或不规则梭形，贴壁生长时呈 “铺路石" 样排列，细胞间隙大于正常肝细胞，部分细胞胞质含空泡（提示代谢异常）；细胞核大且多异形，核仁明显，染色质分布不均，偶见多核细胞，符合肝癌细胞恶性形态。增殖能力强，倍增时间 28-34 小时，对数生长期增殖速度远超正常肝细胞，无接触抑制，密度过高时可堆叠生长，传代 50 代以上仍维持稳定增殖与病毒相关表型。

（三）功能与分子特征

除肝癌通用恶性特征外，细胞具独特功能：可分泌甲胎蛋白（AFP，阳性率高）、γ- 谷氨酰转肽酶（GGT）等肝癌标志物，同时持续表达 HBV 抗原，可通过 ELISA 或免疫荧光检测；分子层面存在 p53 基因突变、PI3K/AKT 信号通路激活等肝癌常见异常，且 HBV 整合片段可影响 MYC 等宿主癌基因表达，高度贴合临床 HBV 相关肝癌的分子病理特征。

二、体外培养关键条件

（一）培养基与环境

基础培养基选用 DMEM（高糖），添加 10%-12% 低内毒素胎牛血清（避免影响 HBV 抗原表达），同时加入 1% 无菌防护试剂防污染。培养基 pH 控制在 7.2-7.4，渗透压 280-320mOsm/kg，可加 10mM HEPES 缓冲液稳定 pH，避免环境波动影响细胞活性与抗原表达。培养环境需严格维持 37℃、5% CO?、95% 湿度，CO?浓度波动不超过 ±0.5%。

（二）传代与维护

细胞贴壁生长且增殖快，传代周期 2-3 天，汇合度达 80%-85% 时需传代：37℃消化液孵育 1-2 分钟，待细胞边缘收缩脱离瓶壁，加含血清培养基终止消化，吹打为单细胞悬液后按 1:4-1:6 比例接种。每日需观察细胞状态，若空泡增多、形态变圆或培养基浑浊，需及时换液或排查污染；若 HBV 抗原表达下降，需检测血清质量或调整温度（严格 37℃）。

（三）冻存与复苏

冻存时用含 10% 二甲基亚砜（DMSO）的胎牛血清作冻存液，梯度降温（4℃ 30 分钟→-20℃ 1 小时→-80℃过夜→液氮保存）；复苏时 37℃水浴 1-2 分钟解冻，加 5 倍体积培养基稀释，离心去 DMSO 后接种，复苏存活率超 75%，复苏后需免疫荧光验证 HBV 抗原表达，确保特性稳定。

三、主要实验应用场景

（一）HBV 相关肝癌机制研究

可通过干扰 HBV 整合片段相关基因（如 HBx 基因），观察细胞增殖、凋亡及癌基因表达变化，明确 HBV 蛋白对肝癌恶性表型的调控作用；也可通过转录组测序筛选 HBV 整合诱导的差异基因（如 IFN 信号通路基因），解析 HBV 致肝癌分子通路，为早期干预提供靶点。

（二）肝癌药物筛选

适用于 HBV 相关肝癌药物研发：将不同浓度抗肝癌药物（如 HBV 蛋白抑制剂、hua疗药）作用于细胞，MTT 法检测活力并计算 IC50，评估杀伤效果；可构建耐药细胞株，研究 ABCB1 等耐药基因表达，探究耐药机制；还可检测药物对 HBV 抗原表达的影响，评估对病毒相关表型的调控作用。

（三）病毒 - 宿主互作研究

利用细胞携带 HBV 基因组的特性，通过 ChIP 技术分析 HBV 整合片段与宿主基因组结合位点，明确病毒整合对宿主基因的影响；检测细胞对干扰素等抗病du药物的反应，研究宿主免疫通路对 HBV 相关肝癌细胞的调控，为 “抗病毒 + 抗肝癌" 联合治疗提供实验基础。

四、实验注意事项

实验前需 ELISA 或 Western blot 验证 HBV 抗原（HBsAg、HBeAg）与 AFP 表达，确保特性稳定，避免传代超 50 代导致病毒表型退化；需预实验筛选适配胎牛血清，固定批次使用。操作需无菌，每传代 3 次 PCR 检测支原体，污染后立即丢弃；虽无感染性病毒，但需在生物安全二级实验室操作。结果解读需结合临床特征，与 HepG2 等非 HBV 相关肝癌细胞对比，避免片面性。