WEHI 164小鼠纤维肉瘤细胞

WEHI 164小鼠纤维肉瘤细胞是体外研究纤维肉瘤恶性进展、侵袭转移机制及抗肿瘤药物筛选的重要细胞模型，源自经化学诱导构建的小鼠纤维肉瘤组织，经体外分离纯化与长期培养鉴定后，保留了纤维肉瘤细胞的核心恶性生物学特性，兼具间质肿瘤细胞的形态特征与强侵袭转移能力，为软组织肉瘤领域的基础研究与临床转化提供了可靠实验材料，在肿瘤学研究中应用广泛且科研价值显著。

从细胞来源与生物学特性来看，该细胞系源自通过甲基胆蒽（一种化学致癌物）诱导的 Balb/c 小鼠纤维肉瘤模型，纤维肉瘤作为起源于间叶组织的恶性肿瘤，以梭形肿瘤细胞增殖、胶原纤维异常分泌及局部侵袭性生长为典型特征，而 WEHI 164 细胞高度还原了这一病理属性。在形态上，WEHI 164 小鼠纤维肉瘤细胞呈典型的梭形或长梭形，胞体细长且大小略有差异，细胞核呈椭圆形或棒状，多位于细胞中央或偏位，核仁清晰可见，染色质呈粗颗粒状不均匀分布，细胞质丰富且呈嗜酸性，体外贴壁培养时，细胞常呈束状或漩涡状排列生长，部分区域因增殖活跃出现细胞重叠堆积，这一形态与临床纤维肉瘤组织切片中的肿瘤细胞形态高度吻合，便于通过光学显微镜观察判断细胞恶性程度与生长状态。在分子特征方面，该细胞表达纤维肉瘤相关的特异性标志物，如波形蛋白（Vimentin，间叶组织细胞特异性标志物）、α- 平滑肌肌动蛋白（α-SMA，部分纤维肉瘤细胞异常表达），通过免疫荧光染色或 Western blot 检测可明确其细胞身份，同时不表达上皮细胞标志物（如细胞角蛋白 CK18）、内皮细胞标志物（如 CD31），有效确保细胞纯度与实验特异性。此外，WEHI 164 细胞还具备典型的恶性肿瘤生物学行为，包括无限增殖能力、锚着独立性生长（在软琼脂克隆形成实验中可形成大量紧密克隆团）及强侵袭转移潜能，Transwell 侵袭实验显示其能高效穿透基质胶，这些特性使其成为研究纤维肉瘤侵袭转移机制的理想模型。

在培养条件与操作要点方面，WEHI 164 小鼠纤维肉瘤细胞对培养环境适应性较强，但需满足间质肿瘤细胞的高代谢与生长需求。培养基推荐使用含 10%-15% 胎牛血清（FBS）的 DMEM 高糖培养基，高糖环境可满足肿瘤细胞旺盛的能量代谢需求，胎牛血清能提供生长因子（如血小板衍生生长因子 PDGF、表皮生长因子 EGF）、黏附蛋白及营养物质，促进细胞活性维持与恶性增殖特性保留；培养环境需严格控制在 37℃、5% CO?的恒温培养箱中，CO?浓度可稳定培养基 pH 值在 7.2-7.4 的适宜范围，避免 pH 波动影响细胞代谢与侵袭能力。传代操作时，需密切观察细胞融合度，当细胞融合度达到 80%-90% 时进行传代，此时细胞活性优良且不易因接触抑制影响增殖。传代前先用磷酸盐缓冲液（PBS）清洗细胞 2-3 次，去除残留培养基与代谢废物，随后加入 0.25% 胰dan白酶 - EDTA 消化液，37℃孵育 3-5 分钟（因细胞贴壁较牢固，消化时间略长于普通成纤维细胞），待细胞间隙明显增大、梭形细胞收缩变圆时，立即加入含血清的培养基终止消化，轻轻吹打细胞使其分散成单细胞悬液（避免过度吹打导致细胞破碎），按 1:3-1:5 的比例接种至新培养瓶中。培养过程中需每 2-3 天更换一次培养基，及时清除细胞代谢产生的乳酸、氨等有害物质，防止其积累抑制细胞生长；同时需严格遵守无菌操作规范，所有操作均在超净工作台内进行，培养基、PBS、消化液等试剂使用前需经过 0.22μm 滤膜过滤除菌，定期对培养箱、超净工作台进行清洁消毒，每 1-2 周通过 PCR 法检测细胞是否存在支原体污染，确保细胞培养稳定性。在细胞冻存与复苏方面，冻存液建议使用含 10% 二甲基亚砜（DMSO）、20% 胎牛血清的 DMEM 高糖培养基，将细胞浓度调整为 1×10?-2×10?个 /mL，按梯度降温法处理：4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃过夜，次日转入液氮长期保存；复苏时需将冻存管迅速放入 37℃水浴锅，持续轻轻摇晃至细胞悬液wan全融化（约 1-2 分钟），立即加入 5-10 倍体积的新鲜培养基稀释 DMSO，1000rpm 离心 5 分钟后弃上清，用新鲜培养基重悬细胞接种，复苏后 24 小时内观察细胞贴壁率（通常要求≥75%），确保细胞后续实验可用性。

在功能特点与科研应用领域，WEHI 164 小鼠纤维肉瘤细胞凭借其贴近临床肿瘤的恶性特性，被广泛应用于纤维肉瘤发病机制研究、抗肿瘤药物筛选、耐药机制解析及肿瘤微环境研究等方面。在发病机制研究中，该细胞是解析纤维肉瘤恶性进展分子机制的重要工具，研究人员可通过转录组学、蛋白质组学技术，筛选细胞中异常表达的致癌基因（如 MYC、RAS）、抑癌基因（如 p53、p16）及信号通路（如 PI3K-AKT-mTOR、MAPK、TGF-β/Smad 通路），结合 CRISPR-Cas9 基因编辑或 RNA 干扰技术，验证目标基因对细胞增殖、凋亡、侵袭的调控作用。例如，通过敲除 WEHI 164 细胞中的 TGF-β 受体 Ⅱ 基因，观察到细胞侵袭能力显著下降，同时胶原分泌减少，可明确 TGF-β 通路在纤维肉瘤侵袭转移中的促癌作用，为寻找潜在治疗靶点提供实验依据。

在抗肿瘤药物筛选方面，WEHI 164 细胞可用于纤维肉瘤治疗药物的体外活性评价，涵盖hua疗药物、靶向药物及新型抗肿瘤制剂。通过 MTT 法、CCK-8 法检测药物对细胞增殖的抑制率，流式细胞术检测药物诱导的细胞凋亡率（如 Annexin V/PI 双染）及细胞周期阻滞情况，Transwell 实验、划痕实验评估药物对细胞侵袭与迁移能力的影响，可快速筛选出具有潜在活性的药物；同时可利用该细胞构建药物耐药模型（如长期低剂量阿mei素诱导），研究耐药相关基因（如 ABC 转运蛋白家族、DNA 修复酶基因）的表达变化，解析耐药机制，为逆转纤维肉瘤耐药提供新策略。在肿瘤微环境研究中，WEHI 164 细胞可与小鼠成纤维细胞、血管内皮细胞、肿瘤相关巨噬细胞共培养，模拟体内纤维肉瘤微环境，分析细胞间相互作用对肿瘤增殖、血管生成的影响。例如，通过共培养实验发现，肿瘤相关巨噬细胞分泌的 IL-6 可激活 WEHI 164 细胞中的 STAT3 信号通路，促进细胞侵袭能力增强，为针对肿瘤微环境的联合治疗研究提供支撑。

此外，WEHI 164 细胞还可用于构建纤维肉瘤动物模型，如裸鼠皮下移植模型、肺转移模型。将细胞接种至裸鼠背部皮下，可形成与临床纤维肉瘤病理特征相似的移植瘤，通过定期测量瘤体体积、重量评估药物抑瘤效果；通过尾静脉注射细胞构建肺转移模型，利用 HE 染色观察肺组织转移灶数量，研究肿瘤远处转移机制，为药物体内活性验证及临床治疗方案优化奠定基础。

综上所述，WEHI 164 小鼠纤维肉瘤细胞凭借其稳定的恶性生物学特性、明确的分子表型及便捷的培养操作，成为纤维肉瘤研究领域的核心工具，为推动软组织肉瘤机制解析、抗肿瘤药物研发及临床治疗方案优化发挥关键作用，未来在肿瘤精准医学研究中仍具有广阔的应用前景。