T-47D人乳腺管癌细胞

T-47D人乳腺管癌细胞作为临床激素受体阳性（HR+）乳腺管癌的经典体外模型，因能精准模拟肿瘤对激素的依赖性与内分泌治疗响应，成为乳腺癌基础研究与转化医学领域的核心工具。该细胞源自 54 岁女性乳腺管癌患者的胸腔积液转移灶，经体外分离培养后，展现出稳定的生物学特性 —— 既保留乳腺导管上皮细胞的形态与功能特征，又携带 HR + 乳腺癌的关键分子改变，尤其在激素调控机制、内分泌耐药及靶向治疗研究中，具有不可替代的价值，被*数百个科研机构用于解析乳腺癌发病机制与开发新型治疗策略。

从生物学特性来看，T-47D 细胞呈现典型的上皮样贴壁生长形态，显微镜下胞体呈不规则多边形，排列紧密且常形成小簇状群落（模拟乳腺导管内细胞的聚集生长模式），胞质丰富且含大量细小脂滴颗粒（乳腺上皮细胞分泌功能的残留特征），部分细胞可见胞质突起，增强细胞间连接。细胞核呈圆形或椭圆形，核仁清晰（1-2 个），染色质分布均匀，核质比约为 1:3（高于正常乳腺上皮细胞的 1:5），增殖速率中等（倍增时间 60-72 小时），传代 50 代后仍能维持稳定的生长曲线与形态特征。其最核心的生物学特征是激素受体的高表达与功能活性：通过免疫荧光或 Western blot 可检测到雌激素受体 α（ERα，阳性率＞90%）与孕激素受体（PR，阳性率＞80%）的核定位表达，且 ERα 以 ERα66 亚型为主（临床 HR + 乳腺癌最主要的功能亚型），能与雌激素（如雌二醇 E2）特异性结合，激活下游靶基因（如 MYC、CCND1）的转录，驱动细胞增殖 —— 在含 10nM E2 的培养基中，细胞增殖速率可提升 40%-60%，而加入 1μM 他mo昔芬（ER 拮抗剂）后，增殖可被抑制 70% 以上，wan美复现临床 HR + 乳腺癌的激素响应特征。此外，T-47D 细胞还表达乳腺上皮特异性标志物细胞角蛋白 18（CK18）与 E - 钙黏蛋白（E-cadherin），同时携带 PI3KCA 基因 E545K 热点突变（约 30% 的 HR + 乳腺癌患者存在该突变），为研究 “激素信号 + PI3K 通路" 的协同致癌机制提供了理想模型。

在细胞培养操作层面，T-47D 细胞的核心要求是维持激素受体活性与增殖稳定性，需精准控制培养条件。适宜环境为 37℃、5% CO?的恒温培养箱，培养基优先选用含 2mM L - 谷an酰胺与 10μg/mL 胰岛素的 RPMI-1640（胰岛素可增强 ERα 的转录活性）；血清需选择 charcoal-stripped 去激素胎牛血清（终浓度 10%），避免血清中内源性激素（如雌二醇、孕酮）干扰实验结果 —— 若使用普通血清，需提前检测激素浓度（要求雌二醇＜5pg/mL），否则可能导致细胞激素响应性下降。抗菌处理采用 100U/mL 青mei素与 100μg/mL 链mei素的混合液，预防细菌污染（T-47D 细胞对污染敏感，轻微污染即可能导致 ERα 表达下调）。日常培养中，每 2-3 天更换一次新鲜培养基，更换时沿培养瓶壁缓慢加入，避免冲击细胞簇导致脱落；传代时机为细胞融合度 80%-90%，操作步骤需注意：先用 37℃预热的 PBS 清洗 2 次（去除残留血清），加入 0.25% 胰dan白酶 - EDTA 消化液（每 25cm2 培养瓶加 1mL），37℃孵育 4-6 分钟（观察到细胞间隙增大、胞体收缩后立即终止），加入含血清的培养基中和消化液，轻轻吹打至单细胞悬液（避免剧烈吹打导致细胞破碎），按 1:3 比例接种至新培养瓶，确保接种密度为 3×10^4 - 5×10^4 cells/cm2（密度过低易导致 ERα 表达下调，过高则易出现接触抑制）。

在科研应用领域，T-47D 细胞的价值贯穿 HR + 乳腺癌研究的多个方向。在激素调控机制研究中，可通过 ChIP-seq 检测 ERα 在基因组上的结合位点，解析雌激素调控的靶基因网络，或利用 CRISPR-Cas9 技术敲除 ERα，探究其对细胞增殖、凋亡及代谢的影响，揭示 HR + 乳腺癌的激素依赖机制。在内分泌耐药研究中，通过长期（3-6 个月）暴露于他mo昔芬或氟维司群（ER 降解剂），可构建稳定的耐药细胞株（如 T-47D/TAMR），对比敏感株与耐药株的差异 —— 发现耐药株常出现 ERα 突变（如 Y537S）、AKT 磷酸化水平升高或 FOXA1 表达下调，为临床耐药机制的解析与逆转策略（如联合 PI3K 抑制剂）的开发提供依据。在药物筛选领域，T-47D 细胞是评估内分泌治疗药物与靶向药物的 “金标准" 模型：可用于筛选新型 ER 拮抗剂（如 SERD 类药物）、ER 降解剂，通过 CCK-8 法检测药物对细胞活力的抑制率，计算 IC50 值；也可评估 CDK4/6 抑制剂（如帕博西尼）与内分泌药物的协同作用，通过流式细胞术检测细胞周期阻滞效果，为临床联合用药方案提供数据支持。此外，在乳腺肿瘤微环境研究中，T-47D 细胞可与成纤维细胞、免疫细胞（如 Treg 细胞）共培养，探究微环境细胞对肿瘤细胞激素敏感性与侵袭能力的影响，解析 HR + 乳腺癌进展的微环境调控机制。

综上所述，T-47D 人乳腺管癌细胞凭借其稳定的激素受体表达、典型的 HR + 乳腺癌病理特征及广泛的科研适用性，成为连接乳腺癌基础研究与临床治疗的关键桥梁，为推动激素调控机制解析、内分泌耐药突破及新型药物研发提供了坚实的实验支撑。